Метод, позволяющий выделить отдельные органоиды из клетки для их дальнейшего изучения

Классический ответ: клеточное фракционирование методом дифференциального (и/или градиентного) центрифугирования.

Коротко суть

1. Гомогенизация: клетки аккуратно разрушают (дезинтегратор, поттер, ультразвук, азотная заморозка/оттаивание) в изотоническом буфере с ингибиторами протеаз. Получают гомогенат.

2. Дифференциальное центрифугирование: гомогенат последовательно центрифугируют, постепенно повышая скорость и время. Более крупные и тяжёлые структуры оседают первыми:

   • низкие g → ядра, клеточный детрит;

   • средние g → митохондрии, лизосомы, пероксисомы;

   • высокие g → микросомы (фрагменты ЭПР), рибосомы.
     На каждом шаге осадок (пеллет) отделяют, надосадочную жидкость центрифугируют дальше. Так получают обогащённые фракции органоидов.

3. Уточняющее разделение (по необходимости):

   • Зональное или изопикническое центрифугирование в градиенте плотности (обычно сахароза, Перколл, Цезиум-хлорид для нуклеиновых кислот). Органеллы «встают» в слои по собственной плотности, что даёт более чистые препараты (например, разделить митохондрии и лизосомы).

   • Можно задействовать иммунопреципитацию мембранных пузырьков (иммуноаффинное выделение) как дополнительный этап.

Проверка чистоты фракций
— определяют маркёрные ферменты: цитохром c-оксидаза (митохондрии), кислые фосфатазы (лизосомы), каталазу (пероксисомы), Na⁺/K⁺-АТФазу (плазмолемма), глюкозо-6-фосфатазу (ЭПР) и т. п.;
— смотрят электронную микроскопию и ставят вестерн-блоты по специфическим белкам.

Итог: метод, который позволяет выделить отдельные органоиды для дальнейшего изучения, — это клеточное фракционирование с применением дифференциального и/или градиентного центрифугирования после гомогенизации клеток.